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人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞(NK-92)說明書
更新時間:2019-01-08 點擊量:2150

    人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞(NK-92)

貨號:HIMCL-060

 

細(xì)胞介紹

NK-92是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來的一株白細(xì)胞介素-2依賴型NK細(xì)胞株。這株細(xì)胞對很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性;鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細(xì)胞。NK-92細(xì)胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能。NK-92細(xì)胞有以下特征: CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標(biāo)記陽性,CD56亮;CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性。

 

細(xì)胞特性

1) 來源:惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞

2) 形態(tài)淋巴母細(xì)胞

3) 含量:>1x106 個/mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

 

運(yùn)輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,1000RPM,常溫條件,離心5min后,潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

 

細(xì)胞用途:僅供科研使用。

                       

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),75%;添加0.2mM肌醇,0.1mM β-Me,0.02mM葉酸,100U IL-2,馬血清12.5%,胎牛血清,12.5%

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%*培養(yǎng)基,10%DMSO現(xiàn)用現(xiàn)。液氮儲存。

二. 細(xì)胞處理

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細(xì)胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中

方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中

3)細(xì)胞凍存:細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,凍存管中加入10%DMSO進(jìn)行凍存。

 

注意事項:

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細(xì)胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

 

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