国产日韩欧美不卡在线,久久99久久精品久久久久久清纯,亚洲午夜精品伦理一区,欧美精品久久七十五区

網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > HBE135-E6E7 人支氣管上皮細胞傳代、復(fù)蘇操作要點
產(chǎn)品目錄
HBE135-E6E7 人支氣管上皮細胞傳代、復(fù)蘇操作要點
更新時間:2023-06-14 點擊量:933

HBE135-E6E7 人支氣管上皮細胞

,16HBE

貨號:YJ-h321(STR鑒定)

價格: 2500.0

規(guī)格: 1*10 6

細胞介紹

該細胞來源ATCC 貨號 CRL-2741

細胞特性

1 來源:人支氣管

2 形態(tài):上皮細胞樣  貼壁生長

3 含量:>1x10^6  細胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

11mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在45X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1 準(zhǔn)備:角質(zhì)細胞無血清培養(yǎng)基 (推薦:YJ-0019培養(yǎng)基,包含兩個組份:基礎(chǔ)培養(yǎng)基1+生長因子1管)或者  KM (SCIENCELL CAT NO:2101) ,添加對應(yīng)因子,再添加0.005mg/ml胰島素,500ng/ml氫化可的松,1% P/S 來培養(yǎng)細胞。

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。

二.細胞處理:

1 凍存細胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

HBE135-E6E7 人支氣管上皮細胞.png


下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項

1.收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。

4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

5.客戶在細胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可以聯(lián)系技術(shù)售后服務(wù),我們隨時給予解答。

 

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實驗代做服務(wù):


滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

国产美女网站在线观看-国产精品亚洲综合网69| 亚洲国产精品一区二区av-日本一级黄色一区二区| 成人免费资源在线观看-欧美国产日韩高清在线综合| 午夜日韩精品在线视频-亚洲网老鸭窝男人的天堂| 国产老熟女激情小视频-成人一区二区人妻不卡视频| 国产欧美日韩中文字幕在线-国产伊人一区二区三区四区| 日韩精品亚洲不卡一区二区-成人网在线视频精品一区二区三区| 亚洲av日韩五月天久热精品-国产日韩欧美一区二区三区群战| 91大神国内精品免费网站-亚洲免费电影一区二区| 国产黄片在现免费观看-色老板最新在线播放一区二区三区| 国产福利视频一区二区三区-日韩人妻中文视频精品| 91大神国内精品免费网站-亚洲免费电影一区二区| 亚洲欧洲一区二区福利-亚洲欧美日韩高清中文| 午夜福利院免费在线观看-久久精品日产第一区二区三区画质| 久久网址一区二区精品视频-日产国产欧美视频一区精品| 久久久国产精品电影片-精品孕妇人妻一区二区三区| 国产欧美一区二区三区嗯嗯-欧美一区二区日本国产激情| 91蜜桃传媒一二三区-日韩欧美国产一区呦呦| 免费午夜福利视频在线观看-亚洲成人日韩欧美伊人一区| 久久久精品欧美日韩国产-欧美精品乱码视频在线| 99久热精品免费观看四虎-亚洲天堂精品视频在线| 久久久噜噜噜久久狠狠50岁-精品一区二区三区av| 亚洲国产日韩精品四区-dy888午夜福利精品国产97| 青木玲高清中文字幕在线看-视频在线免费观看你懂的| 国产欧美日本一区二区-一区二区三区亚洲在线播放| 免费午夜福利视频在线观看-亚洲成人日韩欧美伊人一区| 国产传媒中文字幕在线观看-午夜福利视频在线播放观看| 国产av剧情护士麻豆-三级国产精品欧美在线观看| 99久热精品免费观看四虎-亚洲天堂精品视频在线| 久久网址一区二区精品视频-日产国产欧美视频一区精品| 国产av剧情护士麻豆-三级国产精品欧美在线观看| av噜噜国产在线观看-欧美视频亚洲视频一区二区三区| 国产在线观看高清精品-四季av一区二区三区中文字幕| 亚洲欧美日韩二区三区-国产在线欧美一区日韩二区| 99精品只有久久精品免费-蜜臀一区二区三区精品久久久| 欧美视频在线观看国产专区-亚洲91精品在线观看| 午夜日韩精品在线视频-亚洲网老鸭窝男人的天堂| 欧美伦乱淫老妇女激情吧-亚洲女邻居精品二区久久| av一区免费在线观看-中文字幕日韩国产精品视频| 日本中文字幕永久在线人妻蜜臀-欧美一区二区的网站在线观看| 青青操大香蕉在线播放-国产亚洲欧美精品在线观看|