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MDA-MB-361 人乳腺癌細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧
更新時(shí)間:2024-03-19 點(diǎn)擊量:360

MDA-MB-361 人乳腺癌細(xì)胞

Human Breast Cancer Cells

貨號:YJ-h135(STR鑒定)

價(jià)格: 1800.0

規(guī)格: 1*106 

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞源自40歲女性乳腺癌的腦轉(zhuǎn)移組織。 

細(xì)胞特性

1 來源:乳腺癌

2 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,松散貼壁

3 含量:>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5 用途:僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)半貼細(xì)胞和貼壁不牢(懸?。┘?xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況,若細(xì)胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細(xì)胞生長70%-90%對細(xì)胞進(jìn)行傳代,傳代時(shí)需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收。

4備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。                     

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1 準(zhǔn)備L15(推薦YJ-0009)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,20%;雙抗,1%。

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,100%;該細(xì)胞培養(yǎng)不能通入CO2,如果沒有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的,可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來培養(yǎng),培養(yǎng)過程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細(xì)胞處理:

1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

該細(xì)胞為輕微貼壁和懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:

1. 收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤洗后細(xì)胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL)置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

MDA-MB-361 人乳腺癌細(xì)胞.png


下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)

1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):


滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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