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大鼠C肽(C-P)ELISA說明書
更新時間:2013-05-06 點擊量:1064

大鼠C肽(C-P)ELISA說明書

本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本中C肽(C-P)含量。

標本處理及要求

 1.血清、血漿標本可直接測定;

2.尿液、腦脊液、腹腔液:2000-3000轉/分離心10分鐘后,取上清液待測。

3.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

4.采集后盡早進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

試劑盒組成

1

20倍濃縮洗滌液

30ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標試劑

6ml×1瓶

8

標準品(270ng/L)

0.5ml×1瓶

3

酶標包被板

12孔×8條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個

自備物品

1 、 37 ℃ 恒溫箱

2 、 標準規(guī)格酶標儀

3 、 精密移液器及一次性吸頭

4 、 蒸餾水

5 、 一次性試管

6 、 吸水紙

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,在*、第二孔中分別加標

準品 100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二

孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,

混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔

中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各

取 50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混

勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,

濃度分別為180ng/L,120ng/L ,60ng/L,30ng/L, 15ng/L)。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣

品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣

品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混

勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。     

4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復 5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3。

8. 洗滌:操作同 5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止

液后 15分鐘以內(nèi)進行。

計算

    以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的

OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

6.本試劑不同批號組分不得混用。

7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.底物請避光保存。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

C-反應蛋白CRPELISA試劑盒說明書

 

 

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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