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狗外周血白細(xì)胞分離液說明書
更新時間:2016-07-21 點(diǎn)擊量:1895

狗外周血白細(xì)胞分離液說明書

 

 

(細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué))

 

【產(chǎn)品規(guī)格】

 

200ml/Kit

 

【產(chǎn)品組成】

 

 

為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:

 

 

 

 

名稱

產(chǎn)品編號

 

規(guī)格

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

A

狗外周血白細(xì)胞分離液

 

 

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

B

樣本稀釋液(贈品)

2010C1119

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

C

清洗液(贈品)

 

 

2010X1118

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

D

紅細(xì)胞裂解液(贈品)

NH4CL2009

 

100ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

E

說明書

 

 

 

 

 

1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【實驗前準(zhǔn)備】

 

 

 

 

 

 

 

A 適用儀器

 

 

 

 

 

 

 

 

zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

 

 

 

 

 

B 耗材

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

產(chǎn)品名稱

 

產(chǎn)品貨號

 

產(chǎn)地

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15ml 離心管散裝

 

339650

 

美國 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15ml 離心管架裝

 

339651

 

美國 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

50ml 離心管散裝

 

339652

 

美國 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

50ml 離心管架裝

 

339653

 

美國 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

無菌膠頭滴管或塑料滴管

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【檢驗方法】

 

 

 

 

 

 

 

 

 

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

 

首先取抗凝血,根據(jù)樣本量大小,分以下兩種情況:

 

情況 A:血液樣本量小于 5ml 時,實驗方法如下:

 

  • 取一支 15ml 離心管,先加入 5ml 分離液

 

  • 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上,400-500g,離心 20-30min(注:如改

 

變血液樣本及分離液用量,需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間,具體離心條件需客戶自行摸

 

索,以達(dá)到*分離效果。)

 

  • 離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細(xì)胞層(一層或兩層),加入 10 ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細(xì)胞。250g,離心 10min。重復(fù)洗滌 2-3 次,即得所需白細(xì)胞。

 

  • 如有紅細(xì)胞殘留請使用紅細(xì)胞裂解液(產(chǎn)品編號:NH4CL2009)裂解紅細(xì)胞,具體操

 

作方法詳見紅細(xì)胞裂解液使用說明。

 

情況 B:血液樣本量大于等于 5ml 時,實驗方法如下:

 

  • 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管,先加入與樣本等量的分離液。

 

  • 將血液樣本小心加于分離液之液面上,450-650g(zui大離心力可至 1000g),離心20-30min。(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到*分離效果。加入血液樣本后,樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二)。

 

  • 剩余步驟同情況 A”中步驟 3 與步驟 4

 

【注意事項】

 

  • 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*的實驗結(jié)果,在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實驗,血液存放時間越長,細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

 

  • 本實驗不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。

 

  • 分離液用量大于稀釋后血液樣本時,分離效果更佳。

 

  • 當(dāng)血液樣本粘度過高需稀釋時,*稀釋方法:將血液與樣本稀釋液(產(chǎn)品編號:2010C11191:1 稀釋混勻備用。注:不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞档图?xì)胞得率及活性。如血液樣本經(jīng)過稀釋則分離過程中需適當(dāng)降低離心力和離心時間。

 

  • 如實驗后細(xì)胞得率或活性過低,請?zhí)旖驗笠詫で髱椭?,具體詳見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。

 

 

【儲存條件及有效期】

 

 

18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟

 

 

封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

 

 

 

 

【參考值(參考范圍)】

 

本實驗白細(xì)胞提取率及純度大于 80%

 

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

 

 

紅細(xì)胞

 

白細(xì)胞

 

血小板

 

 

 

 

 

 

 

 

4.0-10.0×109

 

含量(個/L

4.0-5.5×1012

中性粒細(xì)胞

淋巴細(xì)胞

單核細(xì)胞

1.0-3.0×1011

 

 

50%-70%

20%-40%

3%-8%

 

 

 

 

 

 

 

 

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

 

  • 所獲得白細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

 

  • 所獲得白細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

 

  • 所獲得白細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

 

D.PCR 技術(shù)

 

注:上述技術(shù)方案詳情請登陸本公司搜索

 

 

純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊,并在說明書項目欄下下載使用。

 

 

【可能存在的問題及解決方法】

 

 

1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:

 

出現(xiàn)情況

出現(xiàn)原因

建議解決方案

 

 

 

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層

轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短

適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

 

 

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中

轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

 

 

 

 

離心后白環(huán)層彌散

細(xì)胞密度過大

調(diào)整細(xì)胞密度

 

 

離心后白環(huán)層太淺或看不見

細(xì)胞密度過小

 

 

 

 

 

  • 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時,恒定離心時間,對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

 

  • 本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級原料,性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

 

注:在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到*分離效果,

 

離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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