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NF-KB p65活性檢測實(shí)驗(yàn)

NF-KB p65活性檢測實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品型號:

所屬分類:酶活性檢測實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品時間:2024-08-30

簡要描述:[平臺項(xiàng)目開展范圍]慢病毒,腺病毒,RNAI類, 分子生物實(shí)驗(yàn),病理實(shí)驗(yàn),免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),細(xì)胞實(shí)驗(yàn),動物實(shí)驗(yàn),蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn),芯片類實(shí)驗(yàn),并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計(jì)指導(dǎo)、基金申請指導(dǎo)、SCI. 核心期刊等服務(wù)。

詳細(xì)說明:

NF-KB p65活性檢測實(shí)驗(yàn)

 

 

 

核轉(zhuǎn)錄因子NF-kappaB (NF-kB) 是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,參與調(diào)控多種與炎癥、抗凋亡、

腫瘤形成和轉(zhuǎn)化有關(guān)的基因表達(dá)。NF- kappaB (NF _kB)初被鑒定為在B細(xì)胞中和免疫球蛋白k輕鏈的增強(qiáng)子結(jié)合。但隨后在非B-細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中被發(fā)現(xiàn),形成NF-KB和kB的復(fù)合物。初在DNA結(jié)合蛋白復(fù)臺物中分離的NF _kB是由p65(ReIA)和p50構(gòu)成的異源雙聚體。其他分離的單體包括p49 (也可稱為p52) , p75 (C-Rel) ,p68(ReIB)。 p65,p68,p75單體起反式激活作用。p50, p49 (p52) 單體具有DNA結(jié)合活力,但只具有微量的反式激活作用。據(jù)報(bào)道p49和NF-kB的單體p65形成具有轉(zhuǎn)錄活力的異源雙體,類似于p50/ p65異源雙體。p49/ p65和p50/ p65異源雙體在細(xì)胞質(zhì)中受一種叫kBa/MAD-3的抑制劑調(diào)節(jié)。

 

IkB和p65單體結(jié)合,阻制了細(xì)胞核中的定位和DNA的結(jié)合。在體外高濃度的p65能形成同源雙聚體,能和DNA微弱地結(jié)合。Poly(dl:dC)能抑制這一 反應(yīng)(14) 。p49和p50也能形 成同源雙聚體,但在細(xì)胞中的濃度很低。通常,在作NF-KB的凝膠遷移實(shí)驗(yàn)時,在20ul的反應(yīng)體積中,有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles的NF -kB9寡核苷酸(pH7.9), 50mMKCI, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油,0.05%NP-40。當(dāng)用純化的蛋白時,250-300ng足以形成凝膠遷移復(fù)合物, 而需用10ug的Hel a細(xì)胞核抽提物。凝膠遷移復(fù)合物在室溫中保溫30分鐘,在50mMTris(pH8 3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝膠電泳中分離凝膠遷移復(fù)合物。含考馬斯蘭和二甲苯藍(lán)色素的加樣溶液只能加入到陰性對照反應(yīng)中,因這兩種色素會加劇NF-kB復(fù)合物的解離。當(dāng)用Hel a細(xì)胞核抽提物作為結(jié)合蛋白來源時,可形成兩種序列特異的凝膠遷移復(fù)合物,即p50/p50同源雙聚體和p50/ p65異源雙聚體。在表達(dá)p49,p50, p65的細(xì)胞中, 可檢測到4個序例特異的凝膠遷移復(fù)合物(p49/ p49,p50/ p50,p50/ p65,p49/ p65),如果存在高濃度的p65,可檢測到微量的p65/p65.

 

下列試劑可加強(qiáng)NF- kB在體外的結(jié)合: mM的GTP, ATP, 精胺,亞精胺,鋇或鈣離子,ng的

Co+3(NH3)6 (12) 。提取組織或細(xì)胞核蛋白,利用不同形式的NF -Kb p65抗體捕獲細(xì)胞核蛋白并加以區(qū)分,通過酶標(biāo)儀450nm處測定核蛋白標(biāo)準(zhǔn)品與NF -Kb p65吸光度值,進(jìn)行定量比較,從而明確目的蛋白的活化度。

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA測序

動物實(shí)驗(yàn)

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細(xì)胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)



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